信帆生物教您支原體檢測試劑盒使用小妙招
本試劑盒是利用熒光染料（bisbenzimide,Hoechst 33258）檢測支原體污染。這種染料會結合到DNA的A-T富集區(qū)域，因為支原體的DNA中A-T含量高（55％～80％），所以可將其染色而被檢測到。被支原體污染的細胞經(jīng)染色后在細胞周圍可看到許多大小均一的熒光小點，即為支原體的DNA染色斑，說明有支原體污染。Hoechst 33258的大激發(fā)波長為346nm，大發(fā)射波長為460nm；Hoechst 33258和雙鏈DNA結合后，大激發(fā)波長為352nm，大發(fā)射波長為461nm。
操作步驟：
貼壁細胞：
1.被檢細胞接種于無菌的6孔細胞培養(yǎng)板中，接種密度為1-2×104。同時，接種正常無支原體感染的同種細胞，作為陰性對照。
2.5天后，先吸去培養(yǎng)液，再加入1ml的固定液，靜置20min，
3.吸去固定液，晾干。
4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液（Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細胞），37℃避光放置15-20min或室溫靜置20～30min。
5.吸去Hoechst 33258工作液，加入2ml滅菌超純水洗滌三次，直接風干。風干后加入一滴封片液，并以蓋玻片覆蓋。
6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā)，觀察細胞周圍是否有藍色熒光小點或串珠狀熒光小點。
懸浮細胞：
1.收集需檢測的細胞，1500rpm，5min。
2.將收集的細胞涂片于載玻片上，再加1ml的固定液，靜置20min。
3.吸去固定液，晾干。
4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液（Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細胞），37℃避光放置15～20min或室溫靜置20～30min。
5.吸去Hoechst 33258工作液，用無菌水洗滌玻片3次，直接風干。風干后加入一滴封固液，并以蓋玻片覆蓋。
6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā)，觀察細胞周圍是否有藍色熒光小點或串珠狀熒光小點。
注意事項：
1.Hoechst工作液對人體有害，請注意防護。
2.固定液有刺激性氣味，建議在通風櫥進行固定。
3.支原體檢測時，用不含抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)2～3代，這樣容易避免假陰性結果。
信帆生物公司主要代理產(chǎn)品：
ELISA試劑盒：進口ELISA試劑盒,國產(chǎn)ELISA試劑盒,人elisa試劑盒，大鼠ELISA試劑盒，小鼠ELISA試劑盒等。
培養(yǎng)基：微生物培養(yǎng)基,顯色培養(yǎng)基,BD培養(yǎng)基,gibco培養(yǎng)基等。
血清：胎牛血清,人血清,動物血清，NQBB,Hyclone，Gbico原裝血清 。
生物試劑：Amresco,Sigma,ABM,BIO-RAD,BD,ABCAM等進口試劑。
標準品對照品：進口對照品,進口對照藥材,進口標準品.
抗體：一抗,二抗，流式抗體等。
放免試劑盒：進口放免試劑盒，國產(chǎn)放免試劑盒，進口美國鳳凰等放免試劑盒。
實驗室代測服務：放免代測，WB實驗，免疫組化代測，熒光定量PCR代測，病理細胞染色代測，生化實驗代測等。
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