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文章標題《氧化葡萄糖酸桿菌合成吡咯喹啉醌的研究》

文章中引用我司試劑三辛胺

文章詳細內容如下：

吡咯喹啉醌是繼、核黃素輔酶之后第三類輔酶,為B族維生素新成員,具有重要的生理功能,因此,大規模制備吡咯喹啉醌具有重要的意義。由于化學合成步驟多、產率低、異構體和副產品的去除需要多步純化,且重金屬催化劑不利于環境,生物合成吡咯喹啉醌是目前大規模制備zuihao的途徑,為此,本課題主要研究了氧化葡糖桿菌合成吡咯喹啉醌的發酵條件、分離純化及酶法合成的分子基礎,具體如下:1、氧化葡萄糖酸桿菌發酵制備P的條件研究用單因素試驗和正交試驗的方法對氧化葡萄糖酸桿菌發酵培養基進行優化,結果表明,氧化葡糖桿菌發酵制備P的培養基成分zuijia添加量為谷氨酸4g/L,酪氨酸4g/L,FeSO4?7H2O 5mg/L,此時合成Pzui多為0.813ml/L,與理論預測值基本吻合。運用單因素分析方法進行了氧化葡萄糖酸桿菌發酵條件的優化,結果表明,pH值為6.5,發酵溫度為28℃,發酵轉速為200 r/min為zuijia發酵條件。2、氧化葡萄糖酸桿菌發酵液中P的分離純化研究P的結構中包含3個羧基,顯色酸性。根據這個結構特點,采用絡合萃取法對其進行分離純化,發酵液經高速離心,將上清液在雙溶質萃取體系進行絡合萃取,其中三辛胺為絡合劑,正己烷為稀釋劑,得到富含吡咯喹啉醌的上層液,再用氨水反萃,減壓濃縮后冷凍干燥,得到單一產物。經HPLC檢測純度可達到90%以上。該方法條件簡單、過程快捷、便于大規模工業化生物試劑。3、氧化葡萄糖酸桿菌P合成基因簇的克隆與表達及酶法合成研究經過菌體發酵生物試劑P的嘗試,我們進一步用單純且可控的無細胞體系合成吡咯喹啉醌。LC-MS結果顯示,P是可以體外合成的,它的前體是多肽PA。在各種酶的作用下,PA經歷了一系列變化zui終生成P,但是各種酶反應機制目前尚不清楚,有待進一步研究。為此,我們克隆和表達了氧化葡糖桿菌合成P的基因簇各種酶的基因,并通過His-標簽鎳離子分離柱對粗蛋白進行純化與濃縮,獲得了重組菌種、重組質粒及酶等生物材料,嘗試了酶法合成吡咯喹啉醌,該研究尚未取得結果。綜合以上,通過本課題的研究獲得了吡咯喹啉醌快速檢測技術、發酵優化條件、快速分離純化方法、以及合成P基因重組質粒及酶蛋白,為研究吡咯喹啉醌的酶法合成打下堅實的基礎。因此,本課題具有重要的理論價值和實際生物試劑價值。

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